8

Preparering av prøver

Valg av riktig prepareringsmetode er grunnleggende for alt EM-arbeid. For å oppnå best mulig resultat kombinert med rasjonell arbeidspraksis må enhver som skal bruke EM-metodikk drøfte sine prosjekter med EM-avdelingas personale før oppstart.

Kjemisk fiksering
Konvensjonell elektronmikroskopi innebærer en kjemisk fiksering vha aldehyder (glutaraldehyd og/eller formaldehyd) i en egnet buffer etterfulgt av postfiksering i osmiumtetroxid og dehydrering i alkohol før infiltrering og innleiring i en epoxy-plast. Dette etterfølges av snitting av ultratynne snitt, kontrastering og mikroskopering.

Til immun-EM på cryosnitt gjør vi også en kjemisk fiksering av materialet (men med mindre eller ingen glutaraldehyd), materialet infiltreres i sukrose før innfrysing i flytende nitrogen, etterfulgt av cryosnitting og immunmerking på opptinte cryosnitt. Protein A-bundne gullpartikler som kobles til antistoffer brukes som markører.

High pressure freezing
Denne teknologien muliggjør cryofiksering av materiale under svært høyt trykk og lav temperatur. Når cryofiksering etterfølges av frysesubstituering og infiltrering av plast får vi preparater som er minimalt endret i forhold til sin native struktur. Dette representerer den mest optimale prepareringsmetode som er tilgjengelig pr idag. Avdelinga er blant de få EM-laboratorier som har etablert denne metoden.




Tilbake til hovedsiden