Sammendrag

Insitutt for plante- og miljøvitenskap

Vik, N.I. (2003). Transformering av julestjerne (Euphorbia pulcherrima). Doctor Scientiarum avhandling, 2003:21. Norges Landbrukshøgskole. ISSN: 0802-3220, ISBN: 82-575-0560-9

Julestjerne, Euphorbia pulcherrima, er den viktigste potteplante kulturen i Norge. Norske julestjerne foredlere kontaktet oss på Norges Landbrukshøgskole, med ønske om å utforske moderne metoder for å introdusere ny genetisk variasjon i julestjerne. Begrunnelsen var at de følte at den naturlige genetiske variasjonen i populasjoner i artens hjemland (Mexico) var på det meste utnyttet.

Siden vi ikke kjente til noen eksisterende rapporter om gen-transformasjoner i julestjerne, måtte vi først etablere transformasjons protokoller til vårt bruk. Markørgenet gusA ble benyttet i alle disse transformasjonene. Vi valgte å bruke transformasjonsmetodene Agrobacterium, genkanon og DNA-overføring ved elektroforese. De to førstnevnte metodene har vært mye brukt på verdensbasis, mens den sistnevnte er relativt ukjent. Alle metodene gav et transient (midlertidig) genuttrykk av GUS, og den høyeste transformasjonsfrekvensen (24%) ble oppnådd ved bruk av elektroforesemetoden. Stabilt genuttrykk i julestjerne transformert med elektroforese ble forsøkt bekreftet ved bruk av DNA Southern analyser.

Videre transformerte vi julestjerne med rolC genet fra jordbakterien Agrobacterium rhizogenes. Transformering med rolC i andre plantearter har ført til redusert apikal dominans, dvergvekst, økt rotvekst, økt forgrening mm. Vårt mål var å få kontroll over plantehøyde og –forgrening i julestjerne. Stabil transformasjon er forsøkt bekreftet ved Southern analyser. Sammenlignet med kontrollplanter observerte vi i rolC transformanter en sterk utvikling av adventive skudd fra snittflater etter topping. I tillegg var et stort antall av de adventive skuddene sammenvokst i en fasiasjons lignende vekst. Histologiske studier av stammesegmenter viste økt celledeling i cortex hos de transgene plantene. Det er også indikasjoner på at rolC transgene planter har tykkere blader.

Til sist transformerte vi julestjerne med en flavonoid 3’,5’-hydroksylase (F3’5’H) cDNA klon fra petunia. F3’5’H er et enzym i flavonoid biosynteseveien, som leder syntesen av anthocyaniner mot blå delphinidin og fører til dannelse av lilla eller blå farger. Transformasjon ble bekreftet ved bruk av TaqMan real-time PCR og variasjon i relative kopitall av det introduserte genet ble også bekreftet. I tillegg observerte vi pigment forandringer i flere planter, hvor noen hadde en jevn fargeforandring i brakteene og andre blålige sektorer.

Nøkkelord: Euphorbia pulcherrima, gen-transformasjons metoder, DNA overføring ved elektroforese, rolC, adventiv skuddanning, fasiasjon, forgrening, F3’,5’H, plante pigmenter


Oppdatert: 04.12.06
Utskriftsvennlig versjon : Arkiv : Tips en venn